کشت بافت در خانه : مواد مورد نیاز
بعد از مدتها ازمایش روی روش های کشت بافت در خانه اکنون روشی ساده و ارزان را برای کاربران سایت اماده کردم تا از این به بعد هر کسی بخواهد بتواند با موفقیت کشت بافت را در خانه اموزش ببیند .اینگونه است که که می توان این فعالیت جذاب را برای تفریح و اموزش یا حتی برنامه نیمه تجاری در خانه انجام دهید .موفقیت یا عدم موفقیت بسته به شما و نوع عملکرد شما در کلیه مراحل کشت بافت دارد .
کشت بافت در خانه سخت تر و یا شاید هم برای بسیاری ساده تر از کشت بافت در ازمایشگاه های کشت بافت باشد این نیز بستگی به قدرت یادگیری شما دارد که چگونه این فعالیت را یاد بگیرید . کشت بافت در خانه یک نو اوری است برای اینکه موفق باشید در کشت بافت باید فکر کنید و خودتان هم نواوری داشته باشید .وسایل لازم برای کشت بافت در همه شهر ها حتی شهر های کوچک هم در دست رس است .برای یک فعالیت کشت بافت کابردی یا اموزشی شما باید مطالعه داشته باشید و توانایی خواندن مقالات به روز اینگلیسی هم یکی از توانایی هایی است که به شما بسیار کمک خواهد کرد تا از پروتوکول های جدید و بهتر برای کشت بافت گیاه مورد نظر خود استفاده کنید .اموزش مبانی کشت بافت در این سایت امکان پذیر نیست به علت گستردگی این تکنیک بنابراین کتاب هایی که معرفی می شوند را تهیه کنید و به دقت مطالعه نمائید چون مبنای کشت بافت خانگی و ازمایشگاهی تفاوتی با هم ندارند فقط روش انجام و لوازم متفاوت هستند .
کتاب های مفید برای کشت بافت گیاهی :
مبانی کشت بافت گیاهی ; دکتر محمد رضا حسندخت و مهندس راهله ابراهیمی ، انتشارات مرز دانش

کشت بافت گیاهی کاربردی ; مهندس احمد شریفی ، دکتر نسرین مشتاقی و دکتر عبدالرضا باقری ، انتشارات جهاد دانشگاهی مشهد
این دو کتاب را تهیه کنید و بعد از مطالعه دقیق کشت بافت را به صورت بهتری درک خواهید کرد کتاب دوم در اینترنت در سایت خود انتشارات بفروش می رسد برای خرید باید با انتشارات تماس بگیرید .
بعد از مرحله مطالعه این کتاب ها مرحله تهیه لوازم و مواد مورد نیاز برای کشت بافت است .حتماً این کتاب ها را مطالعه کنید .

مواد لازم :
برای مرحله استریل :
الکل ۹۶% : از الکل ۹۶% برای سوخت چراغ الکلی و یا گذاشتن پنس و تیغ بعد اتش زدن تیغ و پنس برای استریل کردن این لوازم استفاده می شود از الکل صنعتی هم می توانید به این منظور استفاده کنید که ارزان تر است و کمتر تبخیر می شود .

الکل ۷۰% : از الکل ۷۰% برای استریل کردن و از بین بردن لایه مومی بافت های خارجی گیاه استفاده می شود برای این کار معمولاً از ۳۰ تا ۶۰ ثانیه ریز نمونه درون الکل ۷۰% قرار می گیرد و بعد از شستشو در اب استریل در محلول ضد عفونی برای استریل نهایی قرار می گیرد .
محلول ضد عفونی : این محلول وایتکس یا مایع سفیدکننده خانگی است بهتر است محصول یک شرکت را مصرف کنید چون خلوص و قدرت محصولات از شرکتهای مختلف با هم تفاوت دارند و تا این طور مقدار مصرف را با دقت به دست بیاورید چون ممکن است مقدار مصرف از مایع سفید کننده شما با مقدار مصرف مایع سفید کننده مورد استفاده من تفاوت داشته باشد .بنده برای ضد عفونی کردن بافت های گیاهی معمولا به نسبت ۱ به ۳ (۱ قسمت سفید کننده با ۳ قسمت اب) استفاده می کنم این محلول برای همان روز قابل مصرف است چون کلر موجود در محلول اب و سفید کننده تبخیر شده و اب خالی باقی می ماند .

برای محیط کشت :
قرص مولتی ویتامین :برای هر لیتر نصف قرص مولتی ویتامین مصرف می شود در صورتی که به قرص های میواینوزیتول دسترسی دارید هر لیتر محیط به ۱۰۰ میلیگرم میواینوزیتول نیاز دارد اگر موجود نباشد هم می شود کار را با موفقیت انجام داد فقط سرعت رشد کاهش میابد .
آگار : اگار ماده ‍ژله کننده برای محیط کشت است می توانید بسته های ۵۰ گرمی را از فروشگاه های لوازم ازمایشگاهی تهیه کنید .اگر می خواهید کارتان با صرفه باشد و کمتر هزینه کنید می توانید به جای اگار ازمایشگاهی آگار آگار شیرینی پزی از فروشگاه لوازم قنادی تهیه کنید قیمت این نوع اگار در حدود ۸۰ هزار تومان هر کیلو می باشد (بنده به این قیمت تهیه کردم) برای هر لیتر ۶ الی ۷ گرم اگار مصرف می شود پس به مقدار مصرف خود تهیه کنید اگر با اون قیمت ما حساب کنید ۱۰۰ گرم اگار اگار شیرینی پزی ۸۰۰۰ تومان برای شما هزینه دارد در صورتی که اگار ازمایشگاهی حداقل ۳۰۰ الی ۴۰۰ هزار تومان هر کیلو هزینه بر می دارد که در بسته های ۵۰ الی ۱۰۰ گرمی قیمت گرانتر هم خواهد بود .پس اگار اگار را از فروشگاه لوازم قنادی تهیه کنید .

آب مقطر : آب مقطر برای ساخت محیط کشت استفاده می شود.از اب دو بار تقطیر موجود در بازار برای این کار استفاده می شود .

محیط کشت : محیط کشت به صورت اماده خریداری می شود یا به صورت استوک های مواد پر مصرف و کم مصرف تهیه شده و در موقع استفاده محلول نهایی تهیه شده و مصرف می شود.در صورتی که محیط کشت ام اس تهیه کردید از این محیط کشت به مقدار ۴٫۴ گرم در لیتر استفاده کنید اگر محیط کشت تهیه نکردید تا حالا یا می خواهید با کود شیمیایی کشت بافت کنید پس باید به جای محیط کشت ام اس کود شیمیایی مناسب تهیه کنید .

کود شیمیایی : در برخی سایت ها به اشتباه برای کشت بافت گیاهی استفاده از هر نوع کودی را پیشنهاد می کنند اما هر نوع کودی مناسب نیست . کود های کامل با درصد نیترو‍ن ، پتاسیم و کلسیم مساوی یا با اختلاف بسیار کم برای کشت بافت لازم است . کود NPK  ۱۰ ۱۰ ۱۰ با ریز مخزی ها یا NPK  ۲۰ ۲۰ ۲۰ با ریز مخزی ها برای کشت بافت بسیار مناسب است از خرید کودهای فله و یا با ناخالصی خوداری کنید .کودی که من برای کارم ازمایش کردم ولی متاسفانه دوباره پیدا نکردم کود NABTA NPK 20 20 20 + TE  بود که برای لیلیوم و سیب زمینی استفاده کردیم.

هورمون ها : هورمون ها برای تمایز زایی یا تمایز زدایی در بافت های گیاهان مورد استفاده قرار می گیرند معمولاً برای بذور و یا ریز قلمه ای که برگ دارد برای مرحله اول نیاز به هورمون نیست ولی اگر هدف کالوس زایی یا بافت زایی از یک بافت دیگر یا القای ساقه جدید باشد هورمون ها مورد استفاده قرار می گیرند .اطلاعات مربوط به هورمون ها در دو کتاب ذکر شده آمده است .هورمون های NAA  ، BAP  و Kinetin در ویال های یک میلیگرمی موجود است در صورت نیاز می توانید با مدیریت وبسایت تماس بگیرید .هورمون های جدید بعد از تهیه به لیست هورمون های موجود اضافه خواهد شد .

لوازم مورد نیاز :

ترازو : ترازوی دیجیتالی برای وزن کردن مواد مورد استفاده و اگار به کار می رود می توانید از ترازوهای دیجیتالی جیبی با دقت یک صدم یا یک دهم استفاده کنید .

بشر یا شیشه مربا : بشر به تعداد مورد نیاز باید تهیه شود به جای بشرهای شیشه ای می شود بشر می تواند با ظروف شیشه در دار مانند شیشه مربا یا بشرهای پلاستیکی جایگزین شود . این ظروف برای الکل صنعتی ،الکل ۷۰% ،  محلول ضد عفونی ، ظرفی برای اب استریل که برای شستشوی نهایی گیاه نیاز است .
پنس ، تیغ جراحی و قیچی : بهتر است از انواع بلند و با کیفیت استفاده شود تا از زنگ زدگی این لوازم جلوگیری شود این لوازم در الکل صنعتی قرار می گیرند و بعد از اتش زدن انها استریل خواهند شد از وایتکس برای استریل کردن این لوازم استفاده نشود چون معمولا باعث زنگ زدن این لوازم می شود. می توانید این لوازم را در دو نایلون فریزر قرار داده و در داخل زودپز استریل کنید .

زودپز :

 این وسیله برای استریل کردن لوازم و محیط کشت استفاده می شود .

چراغ الکلی :

 برای اتش زدن و استریل کردن پنس ، تیغ و قیچی استفاده می شود هر چقدر شیشه ای که برای کشت استفاده می کنید به شعله نزدیکتر باشد احتمال الودگی کمتر خواهد بود .

ظروف کشت :

 ظروف کشت مختلفی وجود دارد به علت الودگی بالا در شیشه های مربا بهتر است در لوله های ازمایش کشت بافت را انجام دهید که با وجود محدودیت فضایی ، الودگی کمتر خواهد بود .

پنبه :

 برای استفاده به عنوان سر لوله های ازمایش از پنبه می شود استفاده کرد در صورتی که به لوله های ازمایشی با در قابل اتوکلاو دسترسی دارید از انها استفاده کنید و پنبه را فراموش کنید .
 

نایلون فریزر :

 بهتر است هر چیزی را می خواهید در زودپز استریل کنید درون یک یا دو عدد نایلون فریزر قرار دهید و در زمان استفاده فقط این لوازم را از نایلون در اورده و استفاده کنید محیط کشت ها را نیز بعد از ریختن در شیشه و بستر در شیشه در نایلون فریزر قرار داده هوای داخل نایلون را خارج کنید و محکم ببندید .اینگونه اگر نتوانستید از لوازم یا محیط در همان روز استفاده کنید لوازم و محیط کشت ها الوده نخواهند شد .

یک اب پاش دستی با الکل ۷۰% یا وایتکس :

 از این اب پاش برای استریل کردن دستها استفاده کنید در هنگام کشت هر چند دقیقه یک بار با اسپری کردن مواد ضد عفونی دست خود را استریل کنید مواظب الکل باشید در کنار چراغ الکلی روشن از الکل استفاده نکنید بگزارید دستهاتون مقداری خشک بشه از الکل بعد دستتون رو نزدیک چراغ الکلی ببرید .از دستکش های لاتکس در اندازه مناسب استفاده کنید چون الکل و یا وایتکس در استفاده بلند مدت باعث از بین رفتن پوست می شوند .بوی وایتکس مشکل بزرگی برای اسپری کردن بر روی دست هاست .

PH  متر :

 برای تنظیم PH  محیط کشت PH  متر لازم است برخی افراد با استفاده از کاغذ تورنوسول برای این کار استفاده می کنند ولی زیاد دقیق نیست .همیشه نیاز به بررسی PH  نیست ولی انجام ان پیشنهاد می شود .

در مطلب بعدی ساخت محیط کشت را اموزش خواهم داد .